自動尿檢分析：冷藏24小時後檢測精準性大不同

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本研究探討尿檢在冷藏24小時後的分析穩定性，發現白血球酯酶和紅血球的穩定性顯著下降，導致假陰性結果增加。相反，對於葡萄糖、亞硝酸鹽和酮體的檢測則穩定性良好。這些結果顯示，尿樣冷藏後檢測的時間長短可能對某些分析結果的可靠性產生重要影響。

在自動化分析之前，將尿液冷藏24小時對常見分析物穩定性的影響研究

Stability of Common Analytes in Urine Refrigerated for 24 h before Automated Analysis by Test Strips

Froom P, Bieganiec B, Ehrenrich Z, Barak M. Stability of common analytes in urine refrigerated for 24 h before automated analysis by test strips. Clin Chem. 2000;46(9):1384-1386.

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10973869/

Abstract

Central outpatient laboratories might find processing large numbers of urinary samples that arrive in the late afternoon inconvenient and refrigerate them overnight before testing. Furthermore, in certain settings clinics might have difficulty assuring that the urine arrives at the laboratory during the same day as the collection. Because the stability of urine samples for delayed automated dipstick analysis (Supertron) is unknown, after defining precision, we retested urines refrigerated for 24 h to determine stability.

Urinalysis was done twice on the same day and repeated after the sample was refrigerated for 24 h. Combur-10S (Roche Diagnostics) dipsticks were read automatically by a Supertron analyzer. Repeat tests on the same day were compared with tests after storage.

Leukocyte esterase had high precision, but after storage ∼25% of the positive samples were less reactive (P <0.005). Precision of hemoglobin retests was also high but declined significantly after storage for 24 h. Urine protein values increased after storage. The precision and stability were excellent for nitrites, glucose, and ketones.

The stability of the automated dipstick urinalysis varies with the substance tested. After refrigeration for 24 h, there is a risk of false-positive results for protein, false-negative results for leukocytes and erythrocytes, and little effect on glucose, nitrite, and ketone values.

摘要

在中央門診實驗室，處理下午晚些時候到達的大量尿液樣本可能不方便，因此會將樣本冷藏過夜後再進行測試。此外，在某些情況下，診所可能無法保證尿液在收集的當天就送達實驗室。由於延遲自動試紙分析（Supertron）的尿液樣本穩定性尚不明確，因此我們在確定精確度後，對冷藏24小時的尿液進行重測以確定其穩定性。

在同一天進行兩次尿液分析，並在樣本冷藏24小時後重複測試。使用Supertron分析儀自動讀取Combur-10S（羅氏診斷）試紙。同日重測結果與儲存後的測試結果進行比較。

白血球酯酶的精確度很高，但儲存後約有25%的陽性樣本反應減弱（P <0.005）。血紅素重測的精確度也很高，但冷藏24小時後顯著下降。尿蛋白值在儲存後增加。亞硝酸鹽、葡萄糖和酮體的精確度和穩定性非常好。

自動試紙尿液分析的穩定性因檢測物質的不同而異。冷藏24小時後，蛋白質有假陽性風險，白血球和紅血球可能出現假陰性，對葡萄糖、亞硝酸鹽和酮體的影響則較小。

Supertron是一種全自動尿液分析系統，可對紅血球、白血球、葡萄糖、蛋白質和亞硝酸鹽進行半定量測試（1）。使用計數室法對紅血球和白血球數量進行測量，顯示出86-98%的一致性，並且與其他半自動尿液分析系統具有極高的相關性（1）。儘管Supertron每小時最多可處理300個試紙，但處理下午晚些時候到達的大量尿液樣本可能會遇到困難。此外，服務範圍廣泛的中央實驗室在確保尿液在同一天收集並送達方面可能會面臨挑戰。儘管留在分析托盤上的尿液樣本在60分鐘內是穩定的（1），但冷藏24小時後的尿液樣本穩定性尚不清楚。使用說明建議在取樣後2小時內進行測試。為了確定穩定性，我們比較了同時進行的自動試紙分析（Supertron）的配對尿液測試結果與冷藏24小時後重複測試的結果之間的精確度。

材料與方法

來自門診診所的尿液樣本在收集後4小時內送達並進行測試。連續樣本（n = 190）在送達後1小時內進行測試和重測，然後在冷藏24小時後使用Supertron全自動分析儀（Hitachi-Boehringer Mannheim，德國曼海姆）和Combur-10 S試紙（羅氏診斷）再次進行測試。為了增加陽性測試的數量，額外進行了213次連續測試，這些樣本在送達後進行了一次測試，並在24小時後重測。因此，我們使用了190次測試來計算精確度，並使用403次測試來計算穩定性。

對尿液分析中各元素在不同陽性程度上的一致性進行了測定。精確度和穩定性之間的顯著差異通過χ²檢驗確定，當樣本數量較少時，使用Fisher精確檢驗。

結果

白血球酯酶測試的精確度非常高（表1），但陽性測試在儲存期間後的穩定性顯著下降（P <0.005）。陰性測試的穩定性幾乎沒有變化。儘管延遲24小時的白血球酯酶測試中有25%為假陰性，但亞硝酸鹽測試的精確度和穩定性均保持良好（表1）。

蛋白尿濃度 ≥5000 mg/L 的樣本較少，但其精確度和穩定性看似較高。然而，低蛋白尿樣本（≥300 mg/L）的測試-重測重複性較低，低濃度測試結果的穩定性降低，導致假陽性結果（表2）。葡萄糖分析結果在高濃度時顯示出良好的精確度和穩定性，但在較低的臨界濃度下，精確度和穩定性較差（表3）。我們沒有使用3000 mg/L的臨界值，因為在精確度測量中，只有一個樣本的值為3000 mg/L，重測時為0 mg/L；在穩定性測試中，只有一個樣本的值為3000 mg/L，重測時為0 mg/L，另有一個樣本的值為0 mg/L，重測時為3000 mg/L。尿液紅血球分析的精確度與白血球酯酶相似，具有極高的精確度，但在24小時後假陰性結果增多（P <0.05）（表4）。在中間臨界值下，低濃度值的穩定性顯著低於精確度，導致假陽性結果。然而，在較低的臨界值下，未觀察到此現象。

討論

我們的主要發現是，尿液中的紅血球和白血球測試精確但在延遲24小時後不穩定，可能導致假陰性結果。相反，尿液中的葡萄糖、亞硝酸鹽和酮體的精確度與穩定性之間沒有顯著差異。除了低蛋白濃度外，所有物質的即時測試-重測精確度都非常高，但冷藏24小時後蛋白尿的假陽性率增加。

半自動反射讀取尿液試紙比目視讀取更為精確（2），使用Miditron Junior進行試紙分析的精確度研究也證明了這一點（3）。研究顯示，人工製備樣本中的葡萄糖、蛋白質和亞硝酸鹽測量具有高度的可重複性（>90%），但血紅蛋白尿的測量精確度較低（4）。

葡萄糖只有在非常高的濃度（>1000 mg/L）時精確。然而，在較低的臨界值下，精確度不足，無法準確定義，這可能是由於樣本數量較少。先前的研究已經證實了市售試紙中葡萄糖測試的準確性不足（5）。與定量己糖激酶法相比，只有Chemstrip能區分尿液中0.3 g/L（正常上限）和0.6 g/L的葡萄糖濃度。其他試紙僅能檢測到濃度大於1 g/L的葡萄糖。這種準確性的缺失部分可能歸因於試紙的精確度不足。

試紙需要小心儲存，因為暴露在空氣中的試紙會隨時間迅速且累積地失去對亞硝酸鹽的特異性（6），在7天後對葡萄糖會出現假陽性結果，而在28天後對血液會出現假陰性結果（7）。然而，蛋白質測量在暴露於空氣56天內仍然準確。為了避免這些問題，我們每天工作結束時會清空分析托盤，並將試紙儲存在原始容器中。

我們的研究並未測試試紙尿液分析的有效性。試紙和顯微鏡檢查都需要額外的證實證據。例如，當以顯微鏡下的血尿作為金標準時，試紙尿液分析在鈍性創傷後的血尿檢測被認為是不精確的（8）。Bonnardeaux等人（9）也指出，異常的試紙尿液測試需要顯微鏡結果的佐證。然而，顯微鏡尿液分析的精確性和準確性問題已經得到了充分的記錄（10）（11）（12）。此外，試紙可以檢測到來自溶解紅細胞的血紅蛋白，但顯微鏡無法檢測到。Bee等人（10）發現，兩種商業試紙試劑對血液的測試與血球計數器或沉降計數的相關性較差，而後兩種方法之間的相關性也較差。儘管如此，自動化試紙在輔助診斷血尿相關疾病或泌尿道感染方面是精確的，但如果尿液樣本的測試被延遲，精確性將會受到影響。

我們的結果可能適用於其他多測試試紙，因為多種產品的精確度、特異性和檢測限已被證明相似（13）。儘管如此，仍然需要進行更多的比較研究。

表1. 試紙白血球酯酶和亞硝酸鹽測量的精確度和穩定性 表2. 試紙蛋白尿測量的精確度和穩定性 表3. 尿液葡萄糖測量的精確度和24小時穩定性 表4. 尿液紅血球測量的穩定性和精確度

參考文獻

 Nagel DW, Seiler DJ. Urinalysis with the new fully automated analyzer Supertron. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1995;33:147-152.
PubMed
2 Peele JD, Gadsden RH, Crews R. Semi-automated vs. visual reading of urinalysis dipsticks. Clin Chem 1977;23:2242-2246.
CrossrefPubMed
3 Gambke B, Kouri T, Kutter D, Nagel D, Vukovich T, Wefers A. Multicentre evaluation of the urine analyser Miditron Junior. Scand J Clin Lab Invest 1997;57:605-611.
CrossrefPubMed
4 Peele JD, Jr, Gadsden RH, Crews R. Evaluation of Ames “Clini-Tek”. Clin Chem 1977;23:2238-2241.
CrossrefPubMed
5 Bandi ZL, Myers JL, Bee DE, James GP. Evaluation of determination of glucose in urine with some commercially available dipsticks and tablets. Clin Chem 1982;28:2110-2115.
CrossrefPubMed
6 Gallagher EJ, Schwartz E, Weinstein RS. Performance characteristics of urine dipsticks stored in open containers. Am J Emerg Med 1990;8:121-123.
PubMed
7 Cohen HT, Spiegel DM. Air-exposed urine dipsticks give false-positive results for glucose and false-negative results for blood. Am J Clin Pathol 1991;96:398-400.
CrossrefPubMed
8 Goldner AP, Mayron R, Ruiz E. Are urine dipsticks reliable indicators of hematuria in blunt trauma patients?. Ann Emerg Med 1985;14:580-582.
CrossrefPubMed
9 Bonnardeaux A, Somerville P, Kaye M. A study on the reliability of dipstick urinalysis. Clin Nephrol 1994;41:167-172.
PubMed
10 Bee DE, James GP, Paul KL. Hemoglobinuria and hematuria: accuracy and precision of laboratory diagnosis. Clin Chem 1979;25:1696-1699.
CrossrefPubMed
11 Gadeholt H. Quantitative estimation of urinary sediment with special regard to sources of error. Br Med J 1964;I:1547–50..
12 Messing EM, Young TB, Hunt VB, Emoto SE, Wehbie JM. The significance of asymptomatic microhematuria in men 50 or more years old: findings of a home screening study using urinary dipsticks. J Urol 1987;137:919-925.
CrossrefPubMed
13 Smith BC, Peake MJ, Fraser CG. Urinalysis by use of multi-test reagent strips: two dipsticks compared. Clin Chem 1977;23:2337-2340.
CrossrefPubMed